Тиселиус, Арне: биография
Реальный прорыв для клинического применения электрофоретического анализа при определенных патологических условиях пришел к введению зонного электрофореза на матрице бумажного фильтра. В 1927 году, Тиселиус провел некоторые эксперименты с зонным электрофорезом и разделил фикоэритрин (красный) и фикоциан (синий) в пластинке желатина, получив острые мигрирующие группы, но в то время он не продолжил и не опубликовал работу. Вместе с Кремером в 1950 году был описан микрометод зонного электрофоретического разделения сывороточных белков на фильтровальной бумаге, который требовал 3-4 мг белка, что гораздо меньше в сравнение с 200 мг, необходимыми для анализа методом двигающихся границ. Количественное измерение содержания компонентов получены серийным разрезанием бумаги на одинаковые полоски, элюируя с каждой краситель и оценивая количество колориметрическим методом. Полученная таким образом кривая по существу согласовывалась с таким же сывороточным образцом, измеренным методом двигающихся границ.
Дальнейшая разработка Хаглунда — аппарат для стабилизации зонного электрофореза в стеклянной порошковой колонкой. Белки, после разделения, элюировались буфером и собирались в коллекторе фракций примитивной формы. Хотя этот аппарат был предназначен для аналитических целей, базовая конструкция была впоследствии существенно расширена студентом Тиселиуса Поратом (1957) с использованием других стабилизаторов зоны частиц для электрофоретического разделения очень большого числа протеинов.
Короткая, но очень важная статья «Стационарный электролиз растворов амфолитов» опубликованная в 1941 году впервые описывает фундаментальные принципы, лежащие в основе изоэлектрического фокусирования. В многокомпонентной аппаратуре, в которой содержания отсеков было эффективно предохранено от механических ремиксов при помощи вмешательства проницаемых для электролитов и протеинов мембран, градиент рН был установлен путём электролиза разбавленного раствора сульфата натрия. С этой аппаратурой, Тиселиусу удалось существенно разделить индивидуальные белки в смесях овальбумина (рH=4.6) и гемоглобина (pH=6.8). Из недавнего расширения преимущественно благодаря студетну Тиселиуса Свенсону, возникла насОшибка в сносках?: Неправильный вызов: ключ не был указантоящая, значительно дискриминирующая процедура изоэлектрической фокусировки, которая может оперировать только с микрограммовыми количествами белка.
Можно с полным основанием сказать, что большинство разработок в электрофорезе в период 40 лет, возникли из фундаментальных вкладов, сделанных Тиселиусом.
Адсорбционный анализ: хроматография неокрашенных веществ.
После его назначения профессором в конце 1938 года, Тиселиус очень быстро начал расширять диапазон его исследовательских интересов. Он чувствовал, что электрофорез был едва ли достаточно специфичным для разделения многокомпонентных веществ, возникающих в материалах биологического происхождения, и стал интенсивно интересоваться хроматографией, удивляясь, что редко используют такие процедуры, за исключением разделения цветных соединений.
В первых двух публикациях по этому предмету была описана аппаратура, в которой растворы для абсорбционного анализа проходили с низу в верх через колонку с активированным углем и поступали в прямоугольную кювету, появление растворенных веществ наблюдали диагональной шлиренской оптической системой. Было представлено теоретическое рассмотрение, которое связано с удерживаемым объёмом адсорбированного вещества к его коэффициенту адсорбции, массе адсорбента в колонке. Было показано, что удерживаемые объёмы глюкозы и лактозы в водных растворах пропорциональны количеству адсорбента и уменьшаются с ростом концентрации растворенного вещества, последнее является следствием формы изотермы адсорбции. Смеси глюкозы и лактозы были легко разделены на колонке. В дальнейшей статье изучается адсорбционный анализ некоторых аминокислот и пептидов, следовые количества цианидов добавляются для ингибирования каталитического окисления этих веществ на колонке с углем. Из алифатических аминокислот, глицин не адсорбируется, но длина углеродной цепи имеет решающее влияние, одна СН2 группа значительно увеличивает удерживаемый объём. Ароматические амино кислоты выходят значительно медленнее.
